Avaliação da imunogenicidade de uma porção conservada da proteína LigA de Leptospira interrogans em camundongo

Espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira são o agente causador da leptospirose, uma doença zoonótica amplamente disseminada que afeta humanos e animais. Leptospiras patogênicas colonizam os túbulos renais de uma ampla variedade de animais selvagens e domésticos, os quais excretam as bactérias vivas, via urina, no ambiente. O homem é o hospedeiro acidental e terminal da doença, e após a infecção pode apresentar um quadro variado de manifestações clínicas. Atualmente, estima-se que anualmente cerca de 1 milhão de pessoas são acometidas pela leptospirose em todo o mundo, o que resulta em aproximadamente 60 mil mortes. O entendimento da interação patógeno-hospedeiro, bem como da resposta imune contra proteínas de Leptospira spp., é um passo fundamental para o desenvolvimento de vacinas contra a leptospirose. As proteínas presentes na membrana externa das leptospiras são alvos interessantes de estudo, pois devido a sua localização podem interagir diretamente com o hospedeiro. Resultados prévios indicam que as proteínas Leptospiral Immunoglobulin-like A e B (LigA e LigB) são candidatos vacinais interessantes; ambas proteínas apresentam uma região N-terminal bastante conservada, o que pode ser aproveitada para a geração de anticorpos que possam reconhecer concomitantemente LigA e LigB. Assim, o presente estudo tem como objetivo clonar, expressar e purificar uma sequência que corresponde a porção conservada das proteínas LigA/LigB de L. interrogans sorovar Copenhageni e avaliar suas propriedades imunogênicas. A porção conservada do gene LIC10465 (ligA) foi amplificada por PCR, clonada no vetor pAE e a proteína recombinante expressa em diferentes linhagens de E. coli. A purificação da proteína recombinante foi realizada por cromatografia de afinidade ao níquel. A proteína recombinante produzida foi detectada por Western Blotting e ELISA a partir de incubação com anticorpos monloclonais anti-his, soro hiperimune produzido em animais BALB/c e soros positivos para a leptospirose. A obtenção e validação imunológica dessa proteína, na sua forma recombinante contribuirá significativamente para o avanço dos estudos relacionados à patogenicidade das leptospiras.

Virulence, biofilm formation ability and antimicrobial resistance of staphylococcus aureus isolated from cell phones of university students / Virulência, capacidade de formação de biofilme e resistência antimicrobiana de staphylococcus aureus isolado de telefones celulares de estudantes universitários

INTRODUCTION: Contamination of cell phones can contribute to the dissemination of pathogens in the community and/or hospital environment. OBJECTIVE: To characterize Staphylococcus aureus strains isolated from cell phones of university students. METHODS: Samples were collected from 100 cell phones. Detection of genes associated with virulence factors such as biofilm formation (icaA and icaD), enterotoxins production (SEA, SEB, SEC, and SED), and resistance to methicillin (mecA and mecC) was performed in S. aureus isolates by PCR. Typing mecA gene performed by multiplex PCR. Susceptibility to antimicrobials and biofilm formation rate also evaluated by using disk diffusion test and crystal violet staining. RESULTS: S. aureus was present in 40% of the total samples and about 70% of them belonged to Nursing students. Of the isolates, 85% presented resistance to penicillin and 50% were classified as moderate biofilm producers. In addition, 92.5% of isolates contained the gene icaA and 60% of the gene icaD. Approximately 25% of the isolates presented the mecA gene. Typing of the mecA gene showed the presence of staphylococcal chromosome cassette SCCmec I and c III respectively in 20% and 10% of the isolates. 70% of the samples could not be typed by the technique. Regarding the enterotoxins, the most prevalent gene was SEA (30%) followed by the SEC gene (2.5%). The presence of SED and SEB genes not observed in any of the isolates. CONCLUSION: The cleaning and periodic disinfection of cell phones can contribute to the reduction of the risk of nosocomial infection.

INTRODUÇÃO: A contaminação de celulares pode contribuir para a disseminação de patógenos na comunidade e/ou ambiente hospitalar. OBJETIVO: Caracterizar cepas de Staphylococcus aureus de telefones celulares de estudantes universitários. MÉTODOS: Foram coletadas amostras de 100 telefones celulares. Detecção de genes associados a fatores de virulência quanto a: formação de biofilme (icaA e icaD), produção de enterotoxinas (SEA, SEB, SEC e SED) e resistência à meticilina (mecA e mecC) foi realizada em isolados de S. aureus por PCR. A Tipagem do gene mecA foi realizada por PCR multiplex. A susceptibilidade a antimicrobianos e a taxa de formação de biofilme pelo teste de difusão em disco e coloração com cristal violeta. RESULTADOS: S. aureus esteve presente em 40% do total de amostras, destas, 70% pertenciam a estudantes do curso de enfermagem. Dos isolados, 85% apresentaram resistência à penicilina e 50% foram classificados com moderada formação de biofilme. Além disso, 92,5% dos isolados continham o gene icaA e 60% o gene icaD. Aproximadamente 25% dos isolados apresentaram o gene mecA. A tipagem do gene mecA mostrou a presença do cassete cromossômico estafilocócico SSCmec I e III em respectivamente 20% e 10% dos isolados. 70% das amostras não puderam ser identificadas pela técnica. Das enterotoxinas, o gene mais prevalente foi o SEA (30%), seguido pelo gene SEC (2.5%). A presença dos genes SED e SEB não foi observada nos isolados. CONCLUSÃO: A limpeza e desinfecção periódica dos telefones celulares podem contribuir para a redução do risco de infecção nosocomiais.

A comparative study on the virulence of entomopathogenic fungi against Trogoderma granarium (Everts) (Coleoptera: Dermestidae) in stored grains rice / Um estudo comparativo da virulência de fungos entomopatogênicos contra Trogoderma granarium (Everts) (Coleoptera: Dermestidae) em grãos armazenados de arroz

Entomopathogenic fungi (EPF) now a possible safer microbial control measure that could be considered as a substitute for chemical control of insect pests. Three EPF viz., Metarihizium anisopliae, Isaria furnosoroseus and Beauveria bassiana were evaluated for their virulence against the grubs of Khapra beetle, Trogoderma granarium (Everts) under laboratory conditions. The isolates were applied by two methods viz., diet incorporation and an immersion method with 3rd instar 20 grubs of T. granarium for each. The virulence of EPF was determined using percent mortality. Significantly higher mortality was observed in M. anisopliae applied through immersion (98.33%) and diet incorporation (93.33%) methods followed by B. bassiana (90.83 and 85.83%, respectively). The mortality caused by I. furnosoroseus was statistically lower in immersion and diet incorporation methods i.e. 81.67 and 73.33%, respectively. Based on the immersion method, all EPF were studied for multiple conidial concentration i.e., 1×104, 1×105, 1×106, 1×107 and 1×108 under the same in-vitro conditions. All the isolates were pathogenic to grub of T. granarium at the highest conidial concentration. M. anisopliae was proved the most effective virulent resulting in 98.33% mortality of the pest with LT50 4.61 days at 1 × 108 conidial concentration followed by 90.83 and 81.67 percent mortality with 5.07 and 8.01 days LT50, in the application of B. bassiana and I. furnosoroseus, respectively. M. anisopliae showed higher efficacy and could be considered as promising EPF for the development of myco-insecticides against effective biocontrol of T. granarium.

Os fungos entomopatogênicos (FPE) são agora a possível medida de controle microbiano mais segura, que pode ser considerada um substituto para o controle químico de pragas de insetos. Três EPF viz., Metarihizium anisopliae, Isaria furnosoroseus e Beauveria bassiana foram avaliados quanto à sua virulência contra as larvas do besouro Khapra, Trogoderma granarium (Everts) em condições de laboratório. Os isolados foram aplicados por dois métodos, a saber: incorporação de dieta e um método de imersão com 20 larvas de T. granarium de 3º ínstar para cada um. A virulência do EPF foi determinada usando a mortalidade percentual. Mortalidade significativamente maior foi observada em M. anisopliae aplicado pelos métodos de imersão (98,33%) e incorporação de dieta (93,33%), seguido por B. bassiana (90,83% e 85,83%, respectivamente). A mortalidade causada por I. furnosoroseus foi estatisticamente menor nos métodos de imersão e incorporação de dieta, ou seja, 81,67% e 73,33%, respectivamente. Com base no método de imersão, todos os EPFs foram estudados para múltiplas concentrações de conídios, ou seja, 1 × 104, 1 × 105, 1 × 106, 1 × 107 e 1 × 108 nas mesmas condições in vitro. Todos os isolados foram patogênicos à larva de T. granarium na maior concentração de conídios. M. anisopliae provou ser o virulento mais eficaz, resultando em 98,33% de mortalidade da praga com LT50 4,61 dias na concentração de 1 × 108 conídios seguido por 90,83% e 81,67% de mortalidade com 5,07 e 8,01 dias LT50, na aplicação de B. bassiana e I. furnosoroseus, respectivamente. M. anisopliae apresentou maior eficácia e pode ser considerada como um PFE promissor para o desenvolvimento de micoinseticidas contra o biocontrole efetivo de T. granarium.

A comparative study on the virulence of entomopathogenic fungi against Trogoderma granarium (Everts) (Coleoptera: Dermestidae) in stored grains rice

Abstract Entomopathogenic fungi (EPF) now a possible safer microbial control measure that could be considered as a substitute for chemical control of insect pests. Three EPF viz., Metarihizium anisopliae, Isaria furnosoroseus and Beauveria bassiana were evaluated for their virulence against the grubs of Khapra beetle, Trogoderma granarium (Everts) under laboratory conditions. The isolates were applied by two methods viz., diet incorporation and an immersion method with 3rd instar 20 grubs of T. granarium for each. The virulence of EPF was determined using percent mortality. Significantly higher mortality was observed in M. anisopliae applied through immersion (98.33%) and diet incorporation (93.33%) methods followed by B. bassiana (90.83 and 85.83%, respectively). The mortality caused by I. furnosoroseus was statistically lower in immersion and diet incorporation methods i.e. 81.67 and 73.33%, respectively. Based on the immersion method, all EPF were studied for multiple conidial concentration i.e., 1×104, 1×105, 1×106, 1×107 and 1×108 under the same in-vitro conditions. All the isolates were pathogenic to grub of T. granarium at the highest conidial concentration. M. anisopliae was proved the most effective virulent resulting in 98.33% mortality of the pest with LT50 4.61 days at 1 × 108 conidial concentration followed by 90.83 and 81.67 percent mortality with 5.07 and 8.01 days LT50, in the application of B. bassiana and I. furnosoroseus, respectively. M. anisopliae showed higher efficacy and could be considered as promising EPF for the development of myco-insecticides against effective biocontrol of T. granarium.

Resumo Os fungos entomopatogênicos (FPE) são agora a possível medida de controle microbiano mais segura, que pode ser considerada um substituto para o controle químico de pragas de insetos. Três EPF viz., Metarihizium anisopliae, Isaria furnosoroseus e Beauveria bassiana foram avaliados quanto à sua virulência contra as larvas do besouro Khapra, Trogoderma granarium (Everts) em condições de laboratório. Os isolados foram aplicados por dois métodos, a saber: incorporação de dieta e um método de imersão com 20 larvas de T. granarium de 3º ínstar para cada um. A virulência do EPF foi determinada usando a mortalidade percentual. Mortalidade significativamente maior foi observada em M. anisopliae aplicado pelos métodos de imersão (98,33%) e incorporação de dieta (93,33%), seguido por B. bassiana (90,83% e 85,83%, respectivamente). A mortalidade causada por I. furnosoroseus foi estatisticamente menor nos métodos de imersão e incorporação de dieta, ou seja, 81,67% e 73,33%, respectivamente. Com base no método de imersão, todos os EPFs foram estudados para múltiplas concentrações de conídios, ou seja, 1 × 104, 1 × 105, 1 × 106, 1 × 107 e 1 × 108 nas mesmas condições in vitro. Todos os isolados foram patogênicos à larva de T. granarium na maior concentração de conídios. M. anisopliae provou ser o virulento mais eficaz, resultando em 98,33% de mortalidade da praga com LT50 4,61 dias na concentração de 1 × 108 conídios seguido por 90,83% e 81,67% de mortalidade com 5,07 e 8,01 dias LT50, na aplicação de B. bassiana e I. furnosoroseus, respectivamente. M. anisopliae apresentou maior eficácia e pode ser considerada como um PFE promissor para o desenvolvimento de micoinseticidas contra o biocontrole efetivo de T. granarium.

A comparative study on the virulence of entomopathogenic fungi against Trogoderma granarium (Everts) (Coleoptera: Dermestidae) in stored grains rice / Um estudo comparativo da virulência de fungos entomopatogênicos contra Trogoderma granarium (Everts) (Coleoptera: Dermestidae) em grãos armazenados de arroz

Entomopathogenic fungi (EPF) now a possible safer microbial control measure that could be considered as a substitute for chemical control of insect pests. Three EPF viz., Metarihizium anisopliae, Isaria furnosoroseus and Beauveria bassiana were evaluated for their virulence against the grubs of Khapra beetle, Trogoderma granarium (Everts) under laboratory conditions. The isolates were applied by two methods viz., diet incorporation and an immersion method with 3rd instar 20 grubs of T. granarium for each. The virulence of EPF was determined using percent mortality. Significantly higher mortality was observed in M. anisopliae applied through immersion (98.33%) and diet incorporation (93.33%) methods followed by B. bassiana (90.83 and 85.83%, respectively). The mortality caused by I. furnosoroseus was statistically lower in immersion and diet incorporation methods i.e. 81.67 and 73.33%, respectively. Based on the immersion method, all EPF were studied for multiple conidial concentration i.e., 1×104 , 1×105, 1×106, 1×107 and 1×108 under the same in-vitro conditions. All the isolates were pathogenic to grub of T. granarium at the highest conidial concentration. M. anisopliae was proved the most effective virulent resulting in 98.33% mortality of the pest with LT50 4.61 days at 1 × 108 conidial concentration followed by 90.83 and 81.67 percent mortality with 5.07 and 8.01 days LT50, in the application of B. bassiana and I. furnosoroseus, respectively. M. anisopliae showed higher efficacy and could be considered as promising EPF for the development of myco-insecticides against effective biocontrol of T. granarium.

Os fungos entomopatogênicos (FPE) são agora a possível medida de controle microbiano mais segura, que pode ser considerada um substituto para o controle químico de pragas de insetos. Três EPF viz., Metarihizium anisopliae, Isaria furnosoroseus e Beauveria bassiana foram avaliados quanto à sua virulência contra as larvas do besouro Khapra, Trogoderma granarium (Everts) em condições de laboratório. Os isolados foram aplicados por dois métodos, a saber: incorporação de dieta e um método de imersão com 20 larvas de T. granarium de 3º ínstar para cada um. A virulência do EPF foi determinada usando a mortalidade percentual. Mortalidade significativamente maior foi observada em M. anisopliae aplicado pelos métodos de imersão (98,33%) e incorporação de dieta (93,33%), seguido por B. bassiana (90,83% e 85,83%, respectivamente). A mortalidade causada por I. furnosoroseus foi estatisticamente menor nos métodos de imersão e incorporação de dieta, ou seja, 81,67% e 73,33%, respectivamente. Com base no método de imersão, todos os EPFs foram estudados para múltiplas concentrações de conídios, ou seja, 1 × 104, 1 × 105, 1 × 106, 1 × 107 e 1 × 108 nas mesmas condições in vitro. Todos os isolados foram patogênicos à larva de T. granarium na maior concentração de conídios. M. anisopliae provou ser o virulento mais eficaz, resultando em 98,33% de mortalidade da praga com LT50 4,61 dias na concentração de 1 × 108 conídios seguido por 90,83% e 81,67% de mortalidade com 5,07 e 8,01 dias LT50, na aplicação de B. bassiana e I. furnosoroseus, respectivamente. M. anisopliae apresentou maior eficácia e pode ser considerada como um PFE promissor para o desenvolvimento de micoinseticidas contra o biocontrole efetivo de T. granarium.

Susceptibility of Alabama argillacea and Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae) larvae to Beauveria bassiana associated with kaolin / Susceptibilidade de larvas de Alabama argillacea e Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae) a Beauveria bassiana associada com caulim

Abstract The mortality of the Alabama argillacea and Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae) larvae caused by the kaolin inert powder and the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana were determined under laboratory conditions. Using the caterpillar submersion method, the CG 138 B. bassiana isolate was more pathogenic to A. argillacea than the CG 70, GC 82, ESALQ 634, and ESALQ 645. All five tested isolates caused similar mortality of C. includens. The mortality of first-instar larvae of A. argillacea and C. includens by feeding on leaf-disc impregnated with B. bassiana (CG 138) and kaolin was also determined. Higher A. argillacea mortalities were observed in the B. bassiana (CG 138) treatments, regardless of the presence of kaolin. However, the activity of kaolin + B. bassiana (CG 138) against C. includens was higher than each ingredient alone, indicating an additive action against C. includes larvae. The mortality of A. argillacea and C. includens larvae treated with kaolin + B. bassiana (CG 138) was similar, and the A. argillacea mortality was higher than that of C. includens with kaolin and B. bassiana (GC 138) separated. The treatment kaolin + B. bassiana (CG 138) is promising for the simultaneous management of these two defoliator pests, mainly A. includes. In addition, the monophagous A. argillacea is more susceptible to both kaolin and B. bassiana (GC 138) than the polyphagous C. includens, suggesting that the nutritional ecology plays an important role in the susceptibility of these defoliator species to alternative insecticides.

Resumo A mortalidade de larvas de Alabama argillacea e Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae), causada pelo pó inerte do caulim e pelo fungo entomopatogênico Beauveria bassiana, foi determinada em condições de laboratório. Usando o método de submersão da lagarta, o isolado CG 138 de B. bassiana foi mais patogênico para A. argillacea que os CG 70, GC 82, ESALQ 634 e ESALQ 645 desse fungo. Os cinco isolados testados causaram mortalidade semelhante de C. includens. A mortalidade de larvas de primeiro ínstar de A. argillacea e C. includens pelo método de alimentação em discos foliares impregnados com B. bassiana (CG 138) e caulim foi, também, determinada. A mortalidade de A. argillacea foi maior nos tratamentos com B. bassiana (CG 138), independentemente da presença do caulim. A atividade do caulim + B. bassiana (CG 138) contra C. includens foi maior que cada ingrediente isolado, indicando ação aditiva contra larvas desse Lepidoptera. A mortalidade de larvas de A. argillacea e C. includens, com caulim + B. bassiana (CG 138), foi semelhante e as de A. argillacea maiores que as de C. includens com caulim e B. bassiana (GC 138) isoladamente. O tratamento caulin + B. bassiana (CG 138) é promissor para o manejo simultâneo dessas duas pragas desfolhadoras, principalmente A. includens. Além disso, a monófaga, A. argilacea, é mais suscetível ao caulim e à B. bassiana (GC 138) que a polífaga, C. includens, sugerindo que a ecologia nutricional desempenha papel importante na suscetibilidade dessas espécies desfolhadoras a inseticidas alternativos.

C-terminal Motifs of HIV-1 gp41 as Possible Determinants of Viral Pathogenesis / Motivos C-terminales de gp41 del VIH-1 como posibles determinantes de la patogénesis viral / Motivos C-terminais do HIV-1 gp41 como Possíveis Determinantes da Patogénese Viral

Abstract: human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) is the etiological agent of acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), a pandemic with high economic and social costs. The envelope glycoprotein (ENV) of the virus mediates the infectious process by binding to and entering the host cell, one of the main target components of studies since its discovery. Its endodomain or C-terminal tail (CTT) participates in late replicative cycle processes, such as intracellular trafficking, activation, and cell death, which occurs because it interacts with multiple cellular factors through motifs or signal sequences present throughout its structure. Although these interactions have not been fully understood at specific levels, studies over more than three decades leave no doubtthatthis domain plays a fundamental role in the biology of the virus and probably the development of the disease. This review describes the studies carried out to date that demonstrate the importance of the CTT, focusing on the motifs responsible for its interactions and its possible roles in the pathogenicity of the infection.

Resumen: el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) es el agente etiológico del síndrome de inmunodeficiencia adguirida (SIDA), una pandemia con altos costos económicos y sociales. La glicoproteína de la envoltura (ENV) del virus media el proceso infeccioso al unirse a la célula huésped y entrar en ella, uno de los principales componentes objetivo de los estudios desde su descubrimiento. Su endodominio o cola C-terminal (CTT) participa en procesos tardíos del ciclo replicativo, como tráfico intracelular, activación y muerte celular, lo que ocurre porque interactúa con múltiples factores celulares a través de motivos o secuencias señal presentes en toda su estructura. Aunque estas interacciones no se han entendido completamente a niveles específicos, los estudios durante más de tres décadas no dejan dudas de que este campo juega un papel fundamental en la biología del virus y probablemente en el desarrollo de la enfermedad. Esta revisión describe los estudios realizados hasta la fecha que demuestran la importancia de la CTT, centrándose en los motivos responsables de sus interacciones y sus posibles roles en la patogenicidad de la infección.

Resumo: o vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1) é o agente etiológico da síndrome da imunodeficiência adquirida (AUXILIA), urna pandemia com elevados custos económicos e sociais. A glicoproteína do envelope (ENV) do vírus media o processo infeccioso ligando-se e entrando na célula hospedeira, um dos principais componentes alvo dos estudos desde sua descoberta. Seu endo domínio ou cauda C-terminal (CTT) participa de processos do ciclo replicativo tardio, como tráfego intracelular, ativação e morte celular, que ocorre porque interage com múltiplos fatores celulares por meio de motivos ou sequências-sinal presentes em toda a sua estrutura. Embora essas interações não tenham sido totalmente compreendidas em níveis específicos, estudos ao longo de mais de três décadas não deixam dúvidas de que esse domínio desempenha um papel fundamental na biologia do vírus e provavelmente no desenvolvimento da doença. Esta revisão descreve os estudos realizados até o momento que demonstram a importância da CTT, com foco nos motivos responsáveis por suas interações e seus possíveis papéis na patogenicidade da infecção.

Yeast microbiota of free-ranging amphibians and reptiles from Caatinga biome in Ceará State, Northeast Brazil: High pathogenic potential of Candida famata / Leveduras da microbiota de anfíbios e répteis do bioma Caatinga no Ceará, Nordeste do Brasil: alto potencial patogênico de Candida famata

ABSTRACT: Studies on the fungal microbiota of reptiles and amphibians are necessary to better understand of host-microbe interactions and the establishment of fungal disease in these animals. However, these studies are limited. The present researchidentified yeasts from free-ranging reptiles and amphibians from the Caatinga biome andevaluated the virulence factors production, the antifungal susceptibility in planktonic and biofilm growth and the pathogenicity of Candida famata isolates. Twenty-nine isolates of the genera Candida, Cryptococcus and Rhodotorula were identified by phenotypic and/or molecular methods and production of hydrolytic enzymes in vitro by these genera of fungi was evaluated. In addition, susceptibility of planktonic cells and biofilms to azoles and amphotericin B was evaluated. The pathogenicity of C. famata, the most prevalent yeast species isolated, was evaluated using Caenorhabditis elegans model. C. famata was the most prevalent yeast in amphibian and reptilian microbiota. Phospholipase and protease production was observed in 18/29 and 11/29 of the yeast isolates, respectively, while 100% formed biofilms. Itraconazole presented high minimal inhibitory concentrations against C. famata and C. tropicalis. Amphotericin B reduced the biomass and metabolic activity of biofilms. C. famata induced the mortality of C. elegans. In conclusion, reptiles and amphibians are colonized by yeasts capable of producing important virulence factors, especially by Candida spp. that present low susceptibility to azoles which may result from imbalances in ecosystem. Finally, C. famata isolated from these animals presented high pathogenicity, showing the importance of the study of reptile and amphibians fungal microbiota.

RESUMO: Estudos sobre a microbiota fúngica de répteis e anfíbios são necessários para melhor compreender as interações hospedeiro-microrganismo e o estabelecimento de doenças fúngicas nesses animais. No entanto, esses estudos são limitados. O objetivo da presente pesquisa foi identificar leveduras isoladas de répteis e anfíbios do bioma Caatinga e avaliar a produção de fatores de virulência, a sensibilidade a antifúngicos no crescimento planctônico e de biofilme e a patogenicidade de Candida famata. Vinte e nove isolados dos gêneros Candida, Cryptococcus e Rhodotorula foram identificados por métodos fenotípicos e/ou moleculares e a produção de enzimas hidrolíticas in vitro por esses gêneros de fungos foi avaliada. Além disso, foi avaliada a suscetibilidade de células planctônicas e biofilmes a azólicos e anfotericina B. A patogenicidade de C. famata, a espécie de levedura isolada mais prevalente, foi avaliada usando Caenorhabditis elegans. C. famata foi a levedura mais prevalente na microbiota de anfíbios e répteis. A produção de fosfolipase e protease foi observada em 18/29 e 11/29 dos isolados de levedura, respectivamente, enquanto 100% formaram biofilmes. O itraconazol apresentou altas concentrações inibitórias mínimas contra C. famata e C. tropicalis. A anfotericina B reduziu a biomassa e atividade metabólica dos biofilmes. C. famata induziu a mortalidade de C. elegans. Em conclusão, répteis e anfíbios são colonizados por leveduras capazes de produzir importantes fatores de virulência, especialmente por cepas de Candida spp. que apresentam baixa suscetibilidade a azólicos que podem resultar de desequilíbrio no ecossistema. Por fim, C. famata isolados desses animais apresentaram alta patogenicidade, mostrando a importância do estudo da microbiota fúngica de répteis e anfíbios.

Complete genome sequencing of Pseudomonas syringae pv. actinidiae Biovar 3, P155, kiwifruit pathogen originating from China / Sequenciamento completo do genoma Pseudomonas syringae pv. actinidiae Biovar 3, P155, agente patogênico do kiwi, originário da China

Pseudomonas syringae pv. actinidiae is a bacterial pathogen of kiwifruit. Based on the results of the pathogenicity assay, we sequenced the strain Pseudomonas syringae (Psa3) P155 which possesses a series of virulence and resistance genes, CRISPR candidate elements, prophage related sequences, methylation modifications, genomic islands as well as one plasmid. Most importantly, the copper resistance genes copA, copB, copC, copD, and copZ as well as aminoglycoside resistance gene ksgA were identified in strain P155, which would pose a threat to kiwifruit production. The complete sequence we reported here will provide valuable information for a better understanding of the genetic structure and pathogenic characteristics of the genome of P155.

Pseudomonas syringae pv. actinidiae agente causal do cancro bacteriano do kiwi. Com base nos resultados do teste de patogenicidade, foi sequenciado um isolado de Pseudomonas syringae (Psa3) P155, que abriga a uma série de genes de virulência e resistência, elementos candidatos CRISPR, sequências relacionadas a profagos, modificações na metilação, ilhas genômicas, e também um plasmídeo. O mais importante foram os genes de resistência ao cobre, copA, copB, copC, copD e copZ, bem como, o gene de resistência aminoglicosídea ksgA identificados na estirpe P155, os quais representariam uma ameaça à produção de kiwi. A sequência completa relatada fornecerá informações valiosas para uma melhor compreensão da estrutura genética e as características patogênicas do genoma de P155.

Salmonella Minnesota de origem avícola apresenta fatores de virulência e risco potencial aos humanos / [Salmonella Minnesota poultry origin has virulence factors and potential risk to human]

Objetivou-se avaliar características de virulência, perfil de resistência antimicrobiana e padrão de similaridade genética de 71 cepas de Salmonella Minnesota isoladas na cadeia produtiva de frangos de corte, entre 2009 e 2010, em duas unidades de uma empresa (A e B). Os isolados foram sorotipificados e submetidos ao teste de susceptibilidade antimicrobiana pelo teste de difusão em disco. Utilizando-se PCR, foi avaliada a presença dos genes invA, lpfA, agfA e sefA e os genes de resistência aos betalactâmicos (bla TEM , bla SHV e bla CTX-M ). A relação filogenética foi determinada por RAPD-PCR. Os maiores percentuais de resistência foram para tetraciclina e sulfonamida. Foram reconhecidos oito perfis de resistência aos antimicrobianos entre as cepas isoladas na indústria A, e 11 perfis de resistência na indústria B. Do total de cepas, 100% foram positivas para o gene invA, 98,6% para o gene agfA, 49,3% para o gene lpfA e nenhuma para o gene sefA. Três cepas foram positivas para o gene bla TEM (4,2%) e 11 (15,5%) para o gene bla CTX-M . A avaliação filogenética demonstrou a presença de sete clusters com similaridade superior a 80% e três perfis distintos. Com base no dendrograma, observou-se a disseminação de um mesmo perfil em ambas as empresas.(AU)

The aim of this study was to evaluate virulence characteristics, antimicrobial resistance profile and the pattern of genetic similarity of 71 strains of Salmonella Minnesota isolated in the production chain of broilers between 2009 and 2010, into two units of a company (A and B). Isolates were serotyped and submitted to antimicrobial susceptibility by disk diffusion test. Using PCR, the presence of genes invA, lpfA, agfA and sefA and the genes conferring resistance to beta-lactam (blaTEM, blaSHV and blaCTX-M) were evaluated. The phylogenetic relationship was determined by the RAPD-PCR method. The highest percentages of resistance were to tetracycline and sulfonamide. Eight antimicrobial resistance profiles were recognized among strains isolated in industry A, and 11 resistance profiles in industry B. Of all strains of both industries, 100% were positive for the invA gene, 98.6% to agfA gene, 49.3% for lpfA gene, and no strain showed the sefA gene. Three strains were positive for the gene blaTEM (4.2%), 11 (15.5%) for the blaCTX-M gene. Phylogenetic evaluation showed the presence of seven clusters with similarity greater than 80% and three distinct profiles. Based on the dendrogram we observed the spread with similar profiles in both companies.(AU)

As descobertas genômicas do SARS-CoV-2 e suas implicações na pandemia de COVID-19 / The genomic discoveries of SARS-CoV-2 and their implications for the COVID-19 pandemic

Objetivo: Auxiliar no entendimento da COVID-19 em relação à origem do SARS-CoV-2, suas descobertas genômicas, patogenia, possíveis hospedeiros primários e intermediários, além da comparação com outros coronavírus. Metodos: foram utilizadas as bases de dados Scientific Eletronic Library Online e PubMed, com artigos de revisão e originais, em língua portuguesa e inglesa, pesquisados no período de 05 de março a 10 de abril de 2020, adotando os seguintes descritores: SARS-CoV, COVID-19, coronavirus, Wuhan, genome, structure, origin, transmission, evolution, zoonotic. Os artigos originais identificados foram incluídos nesta revisão, juntamente com artigos de suporte referenciados por estes. Resultados: As características genômicas descritas até o momento podem explicar, em parte, a infectividade e a transmissibilidade do SARS-CoV-2 em humanos. Devido aos notáveis recursos de SARS-CoV-2, incluindo o local otimizado do domínio de ligação ao receptor (RBD) e de clivagem polibásica, é pouco provável um cenário laboratorial para a origem do SARS-CoV-2. Conclusão: Para o presente, é de extrema importância obter mais dados genéticos e funcionais sobre o SARS-CoV-2, incluindo estudos em animais, sequenciamento do vírus em casos muito precoces e identificação dos parentes virais mais próximos do SARS-CoV-2 que circulam em animais.(AU)

Objective: To assist in the understanding of COVID-19 in relation to the origin of SARS-CoV-2, its genomic discoveries, pathogenesis, possible primary and intermediate hosts, in addition to comparison with other coronaviruses. Methods: the Scientific Electronic Library Online and PubMed databases were used, with review articles and originals, in Portuguese and English, researched from March 5 to April 10, 2020, adopting the following descriptors: SARS-CoV , COVID-19, coronavirus, Wuhan, genome, structure, origin, transmission, evolution, zoonotic. The original articles identified were included in this review, along with supporting articles referenced by them. Results: The genomic characteristics described so far may partly explain the infectivity and transmissibility of SARS-CoV-2 in humans. Due to the remarkable resources of SARS-CoV-2, including the optimized site of the receptor binding domain (RBD) and polybasic cleavage, a laboratory scenario for the origin of SARS-CoV-2 is unlikely. Conclusion: For the present, it is extremely important to obtain more genetic and functional data on SARS-CoV-2, including studies on animals, sequencing of the virus in very early cases and identification of the closest viral relatives of SARS-CoV-2 that circulate in animals.(AU)

Serino protease Pet (Plasmid-encoded toxin) de Escherichia coli inativa proteínas do sistema complemento / Serine protease Pet (Plasmid-encoded toxin) from Escherichia coli inactive complement system proteins

A Escherichia coli Enteroagregativa (EAEC) é uma bactéria Gram-negativa facultativa relacionada a casos de diarreia aguda e persistente em crianças e adultos. Este patótipo é caracterizado pelo padrão de aderência agregativa às células epiteliais e é considerado um patógeno emergente. Um dos seus fatores de virulência é a Plasmid-encoded toxin (Pet), uma proteína autotransportadora do grupo das SPATEs (Serino Proteases Autotransportadoras de Enterobacteriaceae), que desempenha um papel importante na patogenicidade da EAEC. O gene pet é albergado pelo pAA2 e, apesar de ser um fator de virulência típico da EAEC, Pet também está presente em outros patótipos de Escherichia coli. O sistema complemento é um importante mecanismo da imunidade inata. Este sistema funciona em cascata e pode ser ativado após a invasão de patógenos. Foi demonstrado na literatura que proteases produzidas por bactérias patogênicas apresentam atividade proteolítica contra componentes do sistema complemento, promovendo evasão do sistema imunológico. Considerando esses fatores, investigamos se Pet apresenta ação proteolítica sobre os componentes do sistema complemento C3, C3b, C4, C4b e C5. O sobrenadante do clone mínimo HB101 (pCEFN) foi utilizado nos ensaios proteolíticos. Os sobrenadantes foram incubados com os componentes do complemento por 5 e 24 horas a 37oC. Produtos de degradação foram analisados por Western Blot utilizando anticorpos primários específicos produzidos. Além disso, ensaios proteolíticos utilizando um inibidor de serino proteases, ensaios proteolíticos com os fatores I e H e ensaios de resistência ao soro humano pré-tratado com Pet foram realizados. De acordo com os resultados obtidos, verificamos que Pet degradou todos os componentes do sistema complemento testados, podendo interromper as três vias de ativação da cascata, Pet por si só é capaz de degradar os componentes do sistema complemento e a Escherichia coli HB101 sobreviveu ao soro humano pré-tratado com a Pet. A toxina Pet pode ser, portanto, um importante fator de virulência relacionado à resistência ao soro, que pode contribuir para que as Escherichia coli causem infecções extraintestinais e sepse.

Estudos alternativos: redução do uso de animais para manutenção e análises da virulência de Leptospira usando cultura celular tridimensional (3D)

A leptospirose é uma doença causada por bactérias do gênero Leptospira e ocorre principalmente em países da zona tropical, afetando todos os mamíferos além de aves, anfíbios e répteis. A contaminação ocorre através do contato direto da pele ou mucosas com água ou solos infectados com urina de animais portadores. Quando patogênicas, essas bactérias podem afetar diversos órgãos, causando doença crônica e aguda. Aproximadamente um milhão de casos, e sessenta mil mortes são registrados no mundo. No Brasil, os casos registrados em 2018 ultrapassaram três mil com letalidade próxima a 10%. Para se compreender melhor a patogenicidade e manutenção da virulência, diversos modelos animais, susceptíveis são utilizados, entre eles, hamsters, porquinhos da índia e gerbils. O uso desses animais continua sendo fundamental nos estudos de leptospirose, porem, são testes dispendiosos e de difícil manutenção. Com o intuito de diminuir a utilização de animais, estabelecemos um novo modelo que contribua na manutenção e nos estudos de virulência de Leptospira. Para isso, foi proposto o modelo celular tridimensional por se aproximar do padrão in vivo e auxiliar nos estudos de interação patógeno – hospedeiro. O modelo foi estabelecido com células epiteliais de pulmão humano, linhagem A549, cultivadas em meio DMEM, Matrigel® e Ágar e infectadas com dois tipos de sorovares: L. interrogans sv. Canicola e sv. Copenhageni. As células foram infectadas em diferentes concentrações (102, 104 e 106). As culturas foram analisadas após 2, 24, 48, 72 horas e 5 dias. As células foram fixadas em paraformoldeído 4% e em seguida efetuadas as imunohistoquímicas, utilizando IgG conjugado a FITC, DAPI e azul de Evans, seguida de analises em microscopia confocal. Nossos resultados mostraram que a concentração inicial de bactérias é um parâmetro crucial para a infecção. Além disso, os dois sorovores apresentaram comportamento de invasão de maneira oposta nos períodos iniciais. Observamos Copenhageni dentro das células em poucas horas, diferentemente do sorovar Canícola, onde foi visualizado um maior número de bactérias dentro das células nos períodos mais tardios. Os testes utilizando Agar e matrigel mostraram-se promissores e podem ser um modelo alternativo e econômico para estudos da virulência de Leptospira. Estudos mais detalhados são necessários a fim de tornar a técnica um modelo padrão nos estudos de virulência desse patógeno em cultura tridimensional.

Candida blankii: um patógeno emergente de difícil diagnóstico e tratamento clínico / Candida blankii: an emerging pathogen difficult to diagnose and to treat clinically

O gênero Candida possui várias espécies conhecidas e que podem tornar-se patogênicas em determinadas situações. Candida blankii é uma espécie emergente que, na última década, foi identificada como um agente de doenças sistêmicas. Ainda não existe um protocolo de tratamento específico, apesar de que n os poucos casos registrados na literatura a terapia adotada foi efetiva. O objetivo deste estudo foi realizar uma revisão bibliográfica para coletar informações relevantes sobre este patógeno como um possível agente etiológico em infecções sistêmicas, bem como sua epidemiologia e os aspectos de sua patogenicidade. (AU)

The genus Candida has several known species and may become pathogenic in certain situations. Candida blankii is an emerging species that in the past decade has been identified as an agent of systemic diseases. There is no specific treatment protocol yet, although in the few cases reported in the literature the therapy adopted was effective. The objective of this study was to conduct a literature review to collect relevant information about this pathogen as a possible etiological agent in systemic infections, as well as its epidemiology and aspects of pathogenicity. (AU)

In-vivo evaluation of pathogenicity and antimicrobial profile susceptibility from Escherichia coli samples isolated from commercial layer hens / Avaliação da patogenicidade in vivo e do perfil de resistência antimicrobiana de amostras de Escherichia coli isoladas de galinhas de postura comercial

Antimicrobial sensitivity and pathogenicity level of 90 strains of Escherichia coli isolated from livers and intestines from commercial layer hens presenting diarrhea were analyzed. To evaluate the antimicrobial susceptibility, all samples were subjected to antimicrobial susceptibility testing using 11 commercial drugs. The results have showed none of the strains was susceptible to all antibiotics tested. All samples showed resistance to two or more drugs. According to the mortality rate of the birds, the in-vivo pathogenicity test classifies the strains into four classes: high, intermediate, low and nonpathogenic. The test has showed 23 (25.5%) of the samples were highly pathogenic, 21 (23.3%) of intermediate pathogenicity, 23 (25.5%) low pathogenic, and 23 (25.5%) nonpathogenic. When the results of the classes of pathogenicity from isolates have been associated with antimicrobial susceptibility, nonpathogenic strains were less sensitive to the antibiotic ampicillin and increased sensitive to streptomycin antimicrobial compared to the others classes of pathogenic. Nonpathogenic strains showed resistance to many antimicrobials, an alert for poultry, since these bacteria might acquire the virulence genes and infect birds, others animals and even human beings.(AU)

Foram verificados a sensibilidade antimicrobiana e o índice de patogenicidade de 90 amostras de Escherichia coli isoladas do fígado e do intestino de pintainhas de postura comercial com diarreia. Para avaliar a sensibilidade antimicrobiana, todas as amostras foram submetidas ao teste de susceptibilidade antimicrobiana por meio de 11 drogas comerciais. Os resultados demonstraram que nenhuma das estirpes foi sensível a todos os antimicrobianos testados. Todas as amostras apontaram resistência a duas ou mais drogas. De acordo com o índice de mortalidade das aves, o teste de patogenicidade in vivo classificou as estirpes em quatro classes: alta, intermediária, baixa e não patogênica. O teste revelou que 23 (25,5%) das amostras foram de alta patogenicidade, 21 (23,3%) de patogenicidade intermediária, 23 (25,5%) de baixa patogenicidade e 23 (25,5%) não patogênicas. Quando os resultados das classes de patogenicidade dos isolados foram associados à sensibilidade antimicrobiana, estirpes não patogênicas apresentaram menor sensibilidade ao antimicrobiano ampicilina e maior sensibilidade ao antimicrobiano estreptomicina, quando comparadas com as estirpes das demais classes de patogenicidade. Estirpes não patogênicas exibiram resistência a vários antimicrobianos, representando um alerta para a avicultura, uma vez que essas bactérias podem adquirir genes de virulência e, assim, infectar aves, outros animais e até mesmo o seres humanos.(AU)